免疫組化檢查是通過抗原抗體反應對組織或細胞中的特定抗原進行定位和定量的病理學檢測技術(shù)，主要通過活檢或手術(shù)標本切片完成。檢查流程包括標本固定、切片制備、抗原修復、抗體孵育、顯色觀察等步驟。
1、標本處理
活檢或手術(shù)切除的組織需立即用中性甲醛固定，防止抗原降解。病理科醫(yī)師對標本進行脫水、透明、浸蠟處理后，用切片機制成3-5微米厚的石蠟切片。部分特殊檢測需采用冰凍切片技術(shù)，將新鮮組織快速冷凍后切片，適用于需要保留酶活性或某些不穩(wěn)定抗原的檢測。
2、抗原修復
石蠟包埋過程會使蛋白質(zhì)交聯(lián)遮蔽抗原表位，需通過熱修復或酶消化處理。熱修復常用pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液高壓煮沸，酶消化多用胰蛋白酶或胃蛋白酶。選擇適當?shù)男迯头椒茱@著影響抗體與抗原的結(jié)合效率，需根據(jù)靶抗原特性調(diào)整。
3、抗體孵育
將一抗滴加在組織切片上，室溫或4℃孵育30分鐘至過夜。一抗多為單克隆抗體，如檢測ER、PR等激素受體常用鼠源單抗。隨后用PBS沖洗未結(jié)合抗體，再滴加辣根過氧化物酶標記的二抗，形成抗原-抗體-酶標復合物。
4、顯色觀察
加入二氨基聯(lián)苯胺顯色底物后，陽性部位會呈現(xiàn)棕色沉淀。也可選用堿性磷酸酶顯色系統(tǒng)產(chǎn)生紅色信號。在光學顯微鏡下觀察染色強度與分布模式，由病理醫(yī)師根據(jù)細胞膜、胞質(zhì)或核的著色情況判斷結(jié)果。部分實驗室采用熒光標記二抗，需用熒光顯微鏡觀察。
5、結(jié)果判讀
免疫組化結(jié)果需結(jié)合HE染色形態(tài)學綜合分析。半定量評分常用Allred評分系統(tǒng)乳腺癌激素受體或H-score強度×陽性細胞百分比。質(zhì)量控制需設立陽性對照和陰性對照，排除假陰性和假陽性干擾。特殊病例需進行多種抗體組合檢測以提高診斷準確性。
接受免疫組化檢查前應避免使用影響檢測結(jié)果的藥物，如激素類藥物可能干擾ER/PR檢測。檢查后保持穿刺部位清潔干燥，出現(xiàn)紅腫熱痛需及時就醫(yī)。取報告時建議攜帶既往病理資料供對比參考，臨床醫(yī)師會結(jié)合免疫表型特征制定個體化治療方案。日常注意觀察相關(guān)癥狀變化，定期復查監(jiān)測病情進展。
溫馨提示：醫(yī)療科普知識僅供參考，不作診斷依據(jù)；無行醫(yī)資格切勿自行操作，若有不適請到醫(yī)院就診
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