諾如病毒PCR檢測糞便怎么處理
諾如病毒PCR檢測糞便樣本需經(jīng)過采集、保存、運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)室處理四個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。糞便樣本處理流程主要包括專用容器采集、低溫保存、生物安全運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)室核酸提取、PCR擴(kuò)增檢測。
1、專用容器采集：
使用醫(yī)院提供的無菌糞便采集容器，取5-10克成型糞便或5毫升稀便。避免混入尿液或消毒劑，采集后立即旋緊容器蓋，容器外標(biāo)注患者信息。嬰幼兒可使用肛拭子采集，拭子頭需完全浸入保存液。
2、低溫保存：
采集后2小時(shí)內(nèi)需將樣本置于2-8℃冷藏，超過2小時(shí)未檢測則應(yīng)冷凍于-20℃以下。病毒RNA在常溫下易降解，冷凍樣本需避免反復(fù)凍融，運(yùn)輸前需確認(rèn)樣本未泄漏。實(shí)驗(yàn)室接收時(shí)會檢查樣本性狀，水樣便需額外標(biāo)注。
3、生物安全運(yùn)輸：
采用三級包裝系統(tǒng)，內(nèi)層為密封樣本管，中層為吸水性材料填充的防漏袋，外層為專用生物安全運(yùn)輸箱。運(yùn)輸箱需保持低溫并附檢測申請單，標(biāo)明"感染性物質(zhì)"標(biāo)識。跨機(jī)構(gòu)運(yùn)輸需符合《可感染人類的高致病性病原微生物菌毒種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》。
4、實(shí)驗(yàn)室核酸提?。?/h3>
實(shí)驗(yàn)室在生物安全柜內(nèi)操作，采用胍鹽裂解法釋放病毒RNA，配合磁珠純化技術(shù)提取核酸。每批次檢測需設(shè)置陽性對照和陰性對照，提取過程需避免氣溶膠產(chǎn)生。對于成型糞便需先進(jìn)行10%懸液制備，離心后取上清液處理。
5、PCR擴(kuò)增檢測：
使用針對諾如病毒ORF1-ORF2連接區(qū)設(shè)計(jì)的特異性引物，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。反應(yīng)體系包含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶、dNTPs和熒光探針，循環(huán)參數(shù)設(shè)置95℃預(yù)變性后，進(jìn)行40個(gè)擴(kuò)增循環(huán)。結(jié)果判讀需滿足擴(kuò)增曲線S型且Ct值≤35，同時(shí)符合內(nèi)標(biāo)檢測要求。
檢測前后需注意個(gè)人防護(hù)，操作者應(yīng)穿戴醫(yī)用防護(hù)口罩、護(hù)目鏡和一次性防護(hù)服。家庭護(hù)理期間患者糞便需用含氯消毒劑處理后再?zèng)_入下水道，接觸污染物后需用肥皂流動(dòng)水洗手至少20秒?；謴?fù)期建議進(jìn)食低脂易消化食物如米粥、饅頭，避免高糖高纖維飲食加重腹瀉癥狀。檢測陰性但癥狀持續(xù)者需考慮復(fù)測或進(jìn)行輪狀病毒、腺病毒等其他腸道病原體篩查。
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